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    3-羥基丙酸高產菌重組質粒的構建方法

    830   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
    2023-03-19 07:31:07
    一種3-羥基丙酸高產菌重組質粒的構建方法屬于生物化工生產領域。鑒于現有產3-羥基丙酸工程菌產量大都較低，發現了適用于肺炎克雷伯氏桿菌的高效tac啟動子以及能轉化3-羥基丙醛為3-羥基丙酸的puuc醛脫氫酶，并以此構建重組工程菌。將該酶編碼基因的序列進行分析后，對該基因進行了化學合成。測序驗證后將該啟動子和酶在肺炎克雷伯氏桿菌中超表達，獲得了重組肺炎克雷伯氏桿菌pET(ptac-puuc)，測定其體內及體外對3-羥基丙醛的催化能力。在體外，該酶對3-羥基丙醛的酶活達到26.31U/mg，是原代肺炎克雷伯氏桿菌(3.82U/mg)的6.9倍。在5L發酵罐中培養改造后的工程菌，經培養基成分、IPTG濃度條件優化后，其48h后3-羥基丙酸產量高達73g/L。
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    化學分析
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