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    快速高通量的基因定點誘變方法

    1093   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
    2023-03-19 07:33:29
    本發明提出了一種快速高通量的基因定點誘變方法,其步驟為:1.構建了一個表達DPNI限制性內切酶的DNA腺嘌呤甲基化酶缺陷的用于定點誘變的菌株;2.根據需要對基因待突變的位置進行序列分析,設計部分重疊(10～16NT)的PCR誘變引物;3.反向PCR擴增;4.擴增后的PCR產物直接化學法轉化上述構建的表達DPNI的DNA腺嘌呤甲基化酶缺陷的菌株,這樣經過DPNI體內篩選就可以得到攜有預定突變的質粒。本發明能夠真正做到簡單快速的定點誘變,且不需訂購特殊修飾的引物,不需要對PCR后的產物進行任何處理步驟(酶切連接,體外雜交,膠回收和體外DPNI的消化處理等)就能方便迅速地構建突變質粒。
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