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    鹵醇脫鹵酶位點特異性標記多功能探針的方法

    1003   編輯：管理員   來源：中冶有色網  
    2023-03-19 07:54:10
    一種鹵醇脫鹵酶位點特異性標記多功能探針的方法，屬于酶檢測技術領域，本發明通過在目標位點引入琥珀突變，然后通過引入與tRNA/RS表達體系完全正交的非天然氨基酸Naek來標記紅外探針，再利用疊氮與炔烴的SPAAC反應將化學熒光染料標記在酶蛋白上，實現了蛋白質的位點特異性標記紅外探針和熒光探針。本發明的操作流程簡單，有效解決了染料標記異質性的問題，克服了傳統化學標記的缺陷，本方法所嵌入探針標記的鹵醇脫鹵酶具有較好的酶活力(7.73U/mg)，保持與野生型鹵醇脫鹵酶相當的熱穩定性和最適反應溫度，表現出較高的紅外吸收值(0.017a.u.)和熒光發射強度(1469a.u.)，并且熒光嵌入效率可以達到49.03％，且酶蛋白在點擊反應過后保留60％以上的活性。本發明方法在蛋白質正交標記中具有廣泛的應用前景。
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    “鹵醇脫鹵酶位點特異性標記多功能探針的方法” 該技術專利(論文)所有權利歸屬于技術(論文)所有人。僅供學習研究，如用于商業用途，請聯系該技術所有人。
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    化學分析
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