本發明涉及一種核酸酶放大的高靈敏電化學免疫分析方法。通過Au-S鍵合作用,在金電極表面自組裝亞甲基藍(MB)標記的發夾DNA,構成電化學免疫傳感界面。以Mg2+、DNA1-抗體1、DNA2-抗體2、DNA3-抗體3的混合溶液為檢測液,在目標蛋白質存在時,抗體1、抗體2、抗體3同時識別目標蛋白質形成免疫復合物,使得DNA1、DNA2與DNA3相互靠近進行鄰位雜交,形成Mg2+依賴性核酸酶,進而催化裂解傳感界面上的發夾DNA,導致MB脫離電極表面,氧化電流減小。通過檢測MB電流的變化,實現對目標蛋白質濃度的測定。該免疫分析方法利用三個DNA-抗體偶合物鄰位形成核酸酶放大檢測信號,提高了檢測靈敏度和選擇性,同時可對目標蛋白質進行快速、一步化檢測,具有很好的臨床應用價值。
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