本發明提供一種全轉錄組范圍單堿基分辨率檢測RNA N6?甲基腺嘌呤修飾的方法及試劑盒。該方法基于體內核糖核酸(RNA)腺嘌呤的N6?烯丙基標記并化學處理誘導其在逆轉錄成DNA過程中發生堿基突變,然后通過核酸測序手段識別突變位點,進而得到a6A位點,該位點即為細胞RNA中原本m6A修飾的位點。本發明方法首次實現了在細胞內進行N6?烯丙基腺嘌呤的特異性標記,該標記不但能夠用于替換細胞內的N6?甲基腺嘌呤位點,并且能夠借助突變測序的手段進行定位。本發明方法與現有應用于m6A檢測的基因測序技術相比,由于突變位點可以精確到單堿基的分辨率,提升了目前普遍采用的基于m6A抗體免疫沉淀與大規模平行測序方法檢測m6A位點的精度,是一個直接的高通量單堿基鑒定方法。
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