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    哺乳動物細胞表達啟動子及其制造和使用方法

    1137   編輯:管理員   來源:中冶有色網  
    2023-03-19 08:56:59
    本發明公開了一種哺乳動物細胞表達啟動子及其制造和使用方法,該方法包括以下步驟:步驟一,通過化學合成的方式合成引物;步驟二,通過PCR反應,獲得啟動子序列;步驟三,通過限制性酶切位點:BglII?和Kpn1,上述啟動子序列插入包含有ori、卡納抗性基因、sv40、sv40?polyA、多酶切位點序列的質粒骨架中,得到?pHep/L1質粒;步驟四,轉染入E.Coli大腸桿菌進行質粒擴增,提取質粒,進行測序;步驟五,將新獲得的質粒插入SEAP和IL10目的基因,通過CsCL密度梯度離心法提取純凈質粒。本發明提高現有質粒和AAV病毒的表達效率。
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