本發明公開了一種三元穿梭載體pCY,其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:17所示。還公開了一種構建CLBV侵染性克隆的方法:(1)提取感染CLBV植株總RNA,反轉錄后采用pCY?CLBV1F、CLBV1R與CLBV2F、pCY?CLBV2R分別進行PCR擴增,得到覆蓋CLBV基因組全長的特異片段CLBV1、CLBV2;(2)用Stu?I、Sma?I酶切pCY;(3)TAR克?。翰捎么姿徜嚪▽LBV1、CLBV2和線性化pCY共轉化酵母菌YPH501,通過同源重組獲得CLBV全長cDNA克隆pCY?CLBV;(4)pCY?CLBV質粒轉化農桿菌,接種柑桔或本生煙,鑒定獲得CLBV侵染性克隆。
聲明:
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我是此專利(論文)的發明人(作者)